蛋白纸上电泳的注意事项

蛋白纸上电泳的注意事项

血清蛋白电泳的影响因素较多，因此要得到重复性高的结果，操作条件要力求一致，注意操作的细节。

一、    滤纸尽量要采用同一品种、同一批号。滤纸选择要求①质地厚，②对蛋白吸附力小；③对染料吸附力小，滤纸空白色浅，④滤纸条应顺纹剪裁。

二、    血淸用毋要恒定，壬要过多。如用量过多，电泳图谱可能分离不清楚。且蛋白与染料结合不呈平行，染色后白蛋白比例减少。

三、    通电后负极和正极两端的绥冲液氢离子浓度略有改

变，故应每次电泳后，将电极调换位置，并在一定时间内全部缓冲液混匀过滤。滅少污染，控制水分蒸发和离子强度的改变，对电极上沉积的结晶及时处理，这样可延长其使用时间。在电泳图谱区带分离不淸时，应考虑缓冲液是否须要更换。
压高，电流大，电泳加速，时间可缩短，但产生热效应大，滤纸上蒸发严重，使电泳图谱短而不淸，故电压电流不能无
限制地增大。
电压、电流和电泳时间应通过实验决定，不要硬性按照公式计算。

五、加热固定的目的是使已分离的蛋白质不致扩散，同时使蛋自质牢固地结合在滤纸上，不致染色时脱落。但加热固定时间和温度，须前后一致，否则误差较大。

电泳后滤纸条未烘干时，纸上有蛋白部分不能与任何物体接触，烘干时也要平放。烘干后，未染色时，.不能有水点滴在纸上有蛋白部分，以免扰乱电泳图谱。   
六、    各种蛋白质与同一种染料的亲和力不一，同时各种染料对蛋白的结合力又不一。所以不同染料或相同染料而不同规格批号均可影响染色结果。染液中除染料外，尚有染料的溶剂（如乙醉）和蛋白质沉淀剂（硫柳汞、氣化汞等>。故染料的种类和染色的时间要前后一致。染色时最好用少量:染液浸染滤纸，染色后弃去。以免同一染液反复过多的浸染，导致染液中盐'类浓度增加，pH升高和乙醉挥发等使白蛋白偏低。

七、    血清标本宜新鲜，不能及时检验时，冰箱中保存，不得超过3日，不可溶血。

由于盐析法分离白蛋白与球蛋白时，有部分《球蛋白也包含在白蛋白部分内。故现用盐析法的白蛋白和球蛋白比例与电泳分析不相一致，但不至有大差别。