电泳技术

稀释比色法稀释比色法是将有色的标准溶液和测定溶液，分盛在直径相同的试管里，眼晴从管侧观察。于溶液颜色较深的一管加入水（或适当的试剂）来稀释，混匀后重新比较颜色。如颜色仍未相同，则再行稀释，直至两管的颜色一致为止。量度被稀释管中溶液的体积从而推算出测定物质的含量。通常是量入一定量的测定熔液而加以稀释，结果的计算是以标准管的含量乘上稀释的倍数。测定溶液浓度=标准竹的含量x稀释倍数血红蛋白测定（酸化法），也是稀释比色法之一。但有所不同，它是用有色的玻璃片代替标准溶液。有一种溶液pH的比色测定，也用一系列不同的宥色胶片作标准。这样用固体标准颜色进行比色，在工作上是方便的，但作标准的有色玻璃片，用后要放在盒内避光保存，以免颜色改变。稀释比色法的优点是操作简单，不需要任何特殊仪器

标准系列比色的优缺点目视比色法是用目力观察透过标准和测定两溶液的光束。使两者颜色的深浅一致（E标=E测),来求测定溶液的浓度。为使达到标准和测定两溶液颜色深浅的一致：可改变溶液的浓度；或改变溶液的厚度；或改变光束的强度。但一般采用前两种方法，现将常用的目视比色法分述于后。标准系列比色法系列比色标准的制备，是选择无色玻璃、管壁厚薄均匀、直径相同的试啻，排列成套（10〜15支）。在各管内依次递增地加入不同量的标准溶液，使各管内的标准物质有一定量的差別（如0.1毫克、0.2毫克、0.3毫克等），然后稀释至同一体积，加入试剂显色。将试管加塞密封，管壁贴上标准物质的含景或编号数，即成一系列标准比色管。将测定溶液按标准管呈色反应的同一方法处理后，倾入与标准哲同一规格的试管中

乙二胺四乙酸盐的作用乙二胺四乙酸盐（EDTA盐）乙二胺四乙酸盐与血中钙络合使钙失去活性而使血液不凝结。用它作抗凝剂在短时间内可保存白细胞增态，能防止血小板凝集，可保存血小板。乙二胺四乙酸盐可用它的钾盐、钠盐或锂盐。钠盐在血液中的溶解度低于钾盐。锂盐的血浆可作钾和钠的测定。乙二胺四乙酸二锂作为抗凝剂的用量是0.84毫克抗凝1毫升血(最低用量是0.52毫克）。将乙二胺四乙酸二锂2*1克溶于10%甲醇水溶液100毫升中，分装于试管。每管放入，0.2毫升（=4.2毫克）。置于160摄氏度烘箱内30分钟使甲醉完全蒸发，可抗凝5毫升血液，供作一般常规血液化学测定用。使用抗凝剂时，应根据其生化性质和抗凝能力恰当选择。抗凝剂与血液之数M比例要适当，不要过多或过少。如抗凝剂数量不足，则部

肝素的作用肝素(Heparin)使用少虽的肝素即可抗凝，且不影响血液内各种成分的化学分析，为极佳的抗凝剂◊1毫克的肝素可抗凝50毫升的血液（有的可抗凝100毫升血液，这决定于肝素制剂的纯度〉。用时先配成1毫升1毫克肝素的水溶液，每试管加0.1毫升，置于80摄氏度烘箱烘干，干后加塞备用，可使5〜10毫升血液不凝固（市售品多为肝素衲溶液，每毫升含肝素12,500国际单位，相当于100毫克。故125国际单位相当于1毫克，使用时可按此计算）。肝素的抗凝作用是抑制血液中凝血酶元转化为凝血酶，因此纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白。但肝素仅可在一定时间内防止血液凝固，此持续时间决定于加入肝素的质量和数量。水蛭素也可用作抗凝剂，将几个水蛭头放入洒褚内，然后将其干燥，研成粉末。1份粉末加入1%氯化钠

草酸钾就一种白色晶体，草酸钾可以溶于水中。性质草酸钾化学式   K2C2O4外观   白色晶体密度   2.13g·cm-3草酸钾是钾的草酸盐，草酸钾化学式为K2C2O4。草酸钾的作用草酸钾与血中的钙离子作用成夢酸钙沉淀，而使血液不凝固。草酸钾10〜20毫克可抗凝10亳升血液。使用方法：通常取5%草酸钾溶液0.2毫升。放入试管中，在100摄氏度以下的烘箱烘干，则草酸钾成粉末留存于管底。此管可作盛血5毫升之用。另一方法是用液体抗凝，20%草酸钾溶液1滴放入试管中，不须经干燥过程，可抗凝5毫升血液。液体抗凝虽有轻度血液稀释，不过稀释甚微，可

蛋白纸上电泳的注意事项血清蛋白电泳的影响因素较多，因此要得到重复性高的结果，操作条件要力求一致，注意操作的细节。一、   滤纸尽量要采用同一品种、同一批号。滤纸选择要求①质地厚，②对蛋白吸附力小；③对染料吸附力小，滤纸空白色浅，④滤纸条应顺纹剪裁。二、   血淸用毋要恒定，壬要过多。如用量过多，电泳图谱可能分离不清楚。且蛋白与染料结合不呈平行，染色后白蛋白比例减少。三、   通电后负极和正极两端的绥冲液氢离子浓度略有改变，故应每次电泳后，将电极调换位置，并在一定时间内全部缓冲液混匀过滤。滅少污染，控制水分蒸发和离子强度的改变，对电极上沉积的结晶及时处理，这样可延长其使用时间。在

影响蛋白电泳的因素一个带电的蛋白质分子，其所以能在电场中移动以及其具有一定的移动速度，取决于其本身所带的电荷、电场强度、溶液的PH、粘度和电渗等因索的影响。一、带电质点所带电荷：如上所说蛋白质由于绥冲液PH的不同，所带的电荷可正可负，在电场里向相反的电极移动。溶液的PH值离等电点越远，则移动的速度越快。蛋白质分子小而带电多者，移动速度较快。分子大而带电少者移动较慢。   二、电场强度：电场强度对电泳速度也起决定的作用，所谓电场强度是每一厘米的电位降。例如滤纸电泳时，滤纸两端长为20厘米，测得的电位降为200伏特。则电场强度为200+20=10伏特/厘米。电场强度愈大，则带电质点移动愈快。三、溶液的离子强度：溶液的离子强度越高，则蛋白质移动的速度

聚丙烯酰胺凝胶电泳和醋酸纤维薄膜电泳简介一、聚丙烯酰胺凝胶电泳：由于被电泳的物质在圆柱形的支持物中电泳，形成不连续的圆盘形区带，因而亦称圆盘电泳。聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，是丙烯酰胺单体（ch2=chconh2>和交联剂甲叉双丙烯酰胺（ch2=chconhch2nhcoch=ch2）在催化剂的作用下聚合而成的一种凝胶。经聚合后的凝胶有一定的孔径大小，而且这孔径可以调节，以适应各种不同电泳物的需要。因此聚丙烯酰胺电泳有分子筛和电泳的双重作用，因而能将蛋白质较细地分离。如人血淸蛋白纸上电泳可分成5〜7个组分，聚丙烯酰胺凝胶电泳则可分成20〜30个组分。在操作过程中较其他电泳方法为复杂，目前一般的临床检验室使用尚少。但它具有高度的分辨能力，在医疗诊断上有一定的发展前途。

电泳仪的作用及工作原理电泳仪有低压、中压、高压三种类型，临床实验室常用的为低压电泳仪。它的构造，主要由直流电源和电泳槽两部分组成。.直流电源：其装置的主体是一个整流器。电泳是需用直流电，因此220伏交流市电经整流器变为直流电源。一般对直流电源的要求是能够输出0〜300伏的可调直流电压。电压需要稳定。电流输出可根据实际需要来设汁。例如用于纸上电泳需电流较小，琼脂电泳需电流较大。一般设计最大输出电、流在200毫安以上。交、流电转为直流电可用电子管整流或晶体整流或可控硅整流。电泳仪是用可控硅整流，它具有体积小重跫轻，输出电压可随意调节和输出电功率大的优点。电泳槽的大小可结合实际使用。但要考虑：1.液体容积不宜过小，因级冲液用量过少，其值易于改变。2.缓冲液面不宜过

蛋白质电泳的基本原理电泳不但应用于蛋白质的分离与含量的测定，而且在免疫学实验中有许多新的应用。例如：诊断乙型肝炎的乙型肝炎抗原（HBAg)的电泳测定>诊断原发性肝癌的甲胎蛋白（AFP>的电泳测定等等。将两个白金电极放在氯化钠溶液中，通上直流电，则两电极间形成一个恒定的电场。溶液中带正电荷的Na+向负极移动，带负电荷的cr向正极移动。结果在负极得到NaOH,在正极得到Cl2。这现象是大家熟悉的，叫做电解。胶体质点（如蛋白质分子）的表面也带有电荷。由于电荷的存在，通电时，胶体质点就能向电场一极移动。这种现象叫做电泳。事实上，不管离子也好，胶体质点也好，这种在电场的影响下移动的现象，在本质上是没有区别的，不过名称不同而已。一般临床检验室对电泳的应用，主要还是蛋白质的检定。