影响蛋白电泳的因素

影响蛋白电泳的因素

一个带电的蛋白质分子，其所以能在电场中移动以及其具有一定的移动速度，取决于其本身所带的电荷、电场强度、溶液的PH、粘度和电渗等因索的影响。

一、带电质点所带电荷：如上所说蛋白质由于绥冲液PH的不同，所带的电荷可正可负，在电场里向相反的电极移动。溶液的PH值离等电点越远，则移动的速度越快。蛋白质分子小而带电多者，移动速度较快。分子大而带电少者移动较慢。   
二、电场强度：电场强度对电泳速度也起决定的作用，

所谓电场强度是每一厘米的电位降。例如滤纸电泳时，滤纸两端长为20厘米，测得的电位降为200伏特。则电场强度为200+20=10伏特/厘米。电场强度愈大，则带电质点移动愈快。

三、溶液的离子强度：溶液的离子强度越高，则蛋白质移动的速度愈慢，而且纸上电泳图谱各组分的距离缩短;反之，则移动快，纸上电泳图谱各组分的距离宽阔。纸上电泳绥冲液的离子强度一般是用0.02〜0.1之间。

四、电滲：电渗是和电泳同时发生的一种副作用。区带电泳的各种支持物（如滤纸、琼脂等）不是绝对中性的，在缓冲液中或多或少带有电荷。例如在纸上电泳的条件下，滤纸带有负电荷，因而与纸相接触的水溶液则带正电荷。
这种在电场中液体对于一个固定的固体相对移动的现象，称为电渗。此时进行电泳血淸蛋白在纸上随着电渗的液流向负极流动。血淸蛋白本身最带负电荷而向正极移动，因此其速度由于电渗的影响而减慢。
假使质点原是向负极移动，则其电泳速度加快。电渗的液流是均匀而缓慢，只是将电泳图谱中各个区带以相同的速度街动，因而对它们分离情况并没有显著的影响。
电渗的强弱决定于许多因素；绥冲液的pH浓度和滤纸的厚度，琼脂的纯度等都有影响。例如厚的滤纸和离子强度较低的绥冲液都可使电渗增加。琼脂的来源和净化的程度，对电渗很有关系。
五、电泳迁移率：电泳速度以厘米2秒/伏特表示，称迁移率。除了质点所带的电荷量及电场的强度之外，质点的形状和缓冲液的粘度对电泳的移速也有影响。
六、蒸发：蒸发是纸上电泳的一个重要千扰因素。由于滤纸电阻大，因而通电时产生一定的热鬼。如电压增大，发热更甚，滤纸上溶液的蒸发更多，产生纸上液流和绥冲液浓度增大，影响于血淸各种蛋白质的分离。因此，在临床检验室的纸上电泳装置，将滤纸置于密闭的电泳槽中，并且采用离子强度适当小的缓冲液和较低的电压和电流，使蒸发减弱不致影响各个蛋白组分的清晰分离。