电泳技术

电泳仪的作用及工作原理电泳仪有低压、中压、高压三种类型，临床实验室常用的为低压电泳仪。它的构造，主要由直流电源和电泳槽两部分组成。.直流电源：其装置的主体是一个整流器。电泳是需用直流电，因此220伏交流市电经整流器变为直流电源。一般对直流电源的要求是能够输出0〜300伏的可调直流电压。电压需要稳定。电流输出可根据实际需要来设汁。例如用于纸上电泳需电流较小，琼脂电泳需电流较大。一般设计最大输出电、流在200毫安以上。交、流电转为直流电可用电子管整流或晶体整流或可控硅整流。电泳仪是用可控硅整流，它具有体积小重跫轻，输出电压可随意调节和输出电功率大的优点。电泳槽的大小可结合实际使用。但要考虑：1.液体容积不宜过小，因级冲液用量过少，其值易于改变。2.缓冲液面不宜过

蛋白质电泳的基本原理电泳不但应用于蛋白质的分离与含量的测定，而且在免疫学实验中有许多新的应用。例如：诊断乙型肝炎的乙型肝炎抗原（HBAg)的电泳测定>诊断原发性肝癌的甲胎蛋白（AFP>的电泳测定等等。将两个白金电极放在氯化钠溶液中，通上直流电，则两电极间形成一个恒定的电场。溶液中带正电荷的Na+向负极移动，带负电荷的cr向正极移动。结果在负极得到NaOH,在正极得到Cl2。这现象是大家熟悉的，叫做电解。胶体质点（如蛋白质分子）的表面也带有电荷。由于电荷的存在，通电时，胶体质点就能向电场一极移动。这种现象叫做电泳。事实上，不管离子也好，胶体质点也好，这种在电场的影响下移动的现象，在本质上是没有区别的，不过名称不同而已。一般临床检验室对电泳的应用，主要还是蛋白质的检定。

弱电解质在溶液中的电离平衡和常败HCl、HNO3是强酸，KOH、NaOH是强验，都是强电解质，其电离情况如上面所述。现在谈一谈弱电解质的电离情况。在溶液中仅部分电离的这类化合物叫做弱电解质。常见的有弱酸如硼酸（H3BO3)、醋酸(CH6COOH)、草酸（h2c2o4）碳酸（H2co3)等；弱碱如氢氧化铵（NH4OH)等；盐类如氣化高汞（HgCl2)、氯化镉（CdCl2)等。一般来说，强电解质在水溶液中几乎是完全电离的，所以强电解质在水溶液中都是以离子状态存在。而弱电解质的情况就不一样，弱电解质在水溶液中除有离子存在外，还有未电离的分子。 比如醋酸（CH3COOH）在水溶液中，—方面CH3COOH分子电离产生H+和CH3COC-。这个过程称为正过程（正反应）。另一方面，电离出来的

0.1N硫代硫酸钠标准溶液的制备Na2S203-5H20分子量=248.2当量=248.2硫代硫酸钠是分析化学最常用的还原剂。常用它来测定酸性溶液中碘的含量,反应如下：2Na2S203+I2==Na2S4O6+2NaI称取结晶硫代硫酸钠25克，溶于新煮沸后泠却的蒸馏水成1000毫升。溶解后加入无水碳酸钠0,2克，放置10天才行标化。标化方法，用球型吸管取0.1N碘酸钾基准溶液20毫升，放入250毫升的三角瓶，加〗10%碘化钾溶液8毫升和1N硫酸溶液（或盐酸）15毫升，此时溶液呈棕红色。将硫代硫酸钠溶液自25毫升滴定管滴入。随滴随摇，直至溶液棕红色变淡黄色时，.加入淀粉指示剂1毫升，溶液即转蓝色。继续滴下硫代硫酸钠液至蓝色消失为终点，计算其校正系数。滴定时注意以下

0.1N碘酸钾基准溶液的制备（标化硫代硫酸钠用）KIO3分子量=214.00当量=35.67碘酸钾在中性液中与碘化钾不起作用，若在酸性液中即能氧化碘化钾而使碘离析。KI03+5KI+6HCl=6KC1+3I2+3H20   在反应中1分子的碘酸钾能产生6个当量的碘，所以碘酸钾的当置是分子量的1/6。琉代琉酸钠的标定，就是利用碘酸钾离析的碘来进行。取碘酸钾约4克，放在干燥器中过夜。精密称取碘酸钾3.567克。用蒸馏水冲入1000毫升的量瓶中，溶解后加蒸馏水至刻度，摇匀，保存在玻璃塞瓶内。

0.1N高锰酸钾标准溶液的制备KMnO4分子量=158.04当量=31.61髙锰酸钾常含少量（少于1%）杂质，不能用直接法制备标准溶液，需经标化。粗略称取高锰酸钾3.5克，放在1000毫升三角瓶中，加.蒸馏水200毫升，煮沸使溶解（高锰酸钾在冷水中较难溶解）。再加入蒸馏水800毫升，摇匀。用玻璃片盖瓶口，放暗处7〜8天，溶液里的有机杂质使MnO4-还原成MnO2沉于瓶底；小心将上清液倾入带玻璃塞的有色瓶中。倾泻时尽量使沉淀不要落入溶液中，因溶液中如有Mn02或锰离子的存在会加速高锰酸钾的分解，不利于溶液保存。若溶液急于应用，可将溶液煮沸、过滤（用石棉或砂芯漏斗过滤，不能用滤纸过滤）即可用。标化方法：将高锰酸钾溶液放入25毫升滴定管中。用球形吸管取0.1N草酸钠基准溶液2

0.1N氢氧化钠标准溶液的制备NaOH分子量=40.0当量=40.0氢氧化钠常含有碳酸盐、硫酸盐和氣化物等杂质，而且有很强的吸湿性，因此制备标准溶液不能用直接法。氢氧化钠溶液中，如含有碳酸盐能影响滴定结果（使用，酚酞指示剂和使用甲基橙指示剂，两者滴定结果有很大的差别。其原理在酸硷滴定的指示剂章节中叙述）。故应先将碳酸盐除去。利用碳酸盐在浓氢氧化钠液中难溶解的性质，使它被淀在容器的底部，然后取其上层淸液，方法如下：取化学纯氢氧化钠110克放在烧杯里，加入蒸馏水200毫标化后溶液的稀释，不要使用量杯或量筒来量取，应用量瓶、吸管或滴定管等器具。但用吸管童取九百多毫升溶液很麻烦，可改变配制的方法。取1000毫升干燥的量瓶（如量瓶不是干燥的，可用烃标化的盐酸溶液冲洗2〜3次，以清除瓶里的水

0.1N草酸基准溶液（标化氢氧化钠用）H2C2O4.2H20分子量=126.068.当量=63.034精密称取结晶的草酸1,5759克，如上述碳酸钠基准液配制法一样，配成250毫升溶液。此液只能保存几天。

0.1N盐酸标准溶液的制备HCl分子量=36.465当量=36,465盐酸是液体。市售的商品虽标有浓度，但不准确，不能用直接法来制备标准溶液。常先加水稀释成近似0.1N的溶液，然后进行标化。取浓盐酸（比重1.175)95毫升，放在1000毫升景瓶中，加水至刻度，摇匀，浓度为近似0.1N。标化方法：取25毫升滴定管，用盐酸（稀释的）冲洗两次，除去滴定管内的水分。然后装入盐酸至刻度0处。取20奄升球形吸管，吸取0.1N碳酸钠基准液少许冲洗吸管内部两次，然后吸取碳酸钠基准液至刻度，移入150毫升三角瓶中。溶液全部流出以后（流出时要将吸管垂直），将吸管尖端触瓶内壁，使吸管残液自然流出。加入甲基橙指示剂2〜3滴。溶液呈黄色。’   自滴定管滴入盐

0.1N硼砂基准溶液的制备Na2B407•10H20分子量=381.42,当量=190.71一分子的硼砂与两分子的盐酸作用，故此硼砂一分子为两当量。反应如下：   Na2B407•l0H20+2HC1=2NaCl+4H3B03+5H20硼砂试剂易于购到，精制容易，含结晶水分子稳定，而且分子莆大，是较理想的基准物质。精密称取4.768克硼砂，放入250奄升的贵瓶内，蒸馈水溶解后，再加水至刻度，摇匀即成。